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      原代細胞培養中的常見錯誤與實用對策

      來源: 上海西格生物科技有限公司 >> 進入該公司展臺 2021/10/26 10:03:34 已瀏覽:
      導讀:原代細胞培養中的常見錯誤與實用對策

      當培養原代細胞時,重要的是要記住,他們不是細胞系,不能同等對待。這里有六個在原代細胞培養中的常見錯誤,以及如何糾正這些錯誤。


      錯誤1:一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間


      對策1:原代細胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴中,保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶,并轉移到無菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒,以便可以立即用于接種細胞,并置于培養箱中。


      錯誤2:解凍小瓶后直接離心原代細胞


      對策2:我們不建議在解凍后離心細胞,因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住,在恢復原代細胞后的第二天更換培養基以去除任何殘留的DMSO。


      錯誤3:允許原代細胞變得過于融合


      糾正3:當生長至100%匯合時,原代細胞可以變得衰老。記住,原代細胞不是100%純,因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95%融合時,對原代細胞進行傳代培養。


      錯誤4:傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化

      對策4:當細胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監測細胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。專門為原代細胞配制的胰蛋白酶中和溶液,但也可以使用10%血清或大豆胰蛋白酶抑制劑。


      錯誤5:原代細胞可以很容易地重新凍存


      對策5:通常我們不重新凍存原代細胞,因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感,重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。


      錯誤6:原代細胞可以無限的增殖

      對策6:與細胞系不同,原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外,如果你正在使用一個增值困難的細胞類型,你應該密切監測細胞形態,因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細胞。


      在培養原代細胞時,記住這六個技術提示是非常重要的。*終,如果你認真、仔細的對待你的細胞,它們也會更好地為你的實驗服務。

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