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      原代細胞分離培養實體組織材料的消化分離法?

      來源: 上海撫生實業有限公司 >> 進入該公司展臺 2021/10/26 09:54:38 已瀏覽:
      導讀:原代細胞分離培養實體組織材料的消化分離法?

      人或動物體內(或胚胎)的組織,將其剪碎至1mm3的組織塊,再采用如下實體組織材料的消化分離法進行原代細胞分離培養

      1、酶消化分離法(*冷消化法)

      ①細胞間質較少的軟組織,如肝、腎、甲狀腺、羊膜、胚胎組織、上皮組織等,用Hanks液清洗組織三次,剪成碎塊大小為4毫米左右。

      ②再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪組織。

      ③加入0.25%的胰蛋白酶,搖勻后放4℃*。

      ④次日再用Hanks液洗滌,棄去上清,共洗2-3次。

      ⑤加入少量含血清的培養基吹打分散,細胞計數,按適當的濃度分瓶培養。

      2、非酶消化法(EDTA消化法)

      ①把組織塊剪碎,呈1mm3大小的組織塊。

      ②將碎組織塊在平皿中用無鈣鎂PBS洗2-3次。

      ③加入消化液(胰蛋白酶或膠原酶或EDTA)于37℃水浴中作用適當時間(中間可輕搖1~2次),若組織塊膨松呈絮狀可終止,若變化不大可更換一次消化液,繼續消化直至膨松絮狀為止。

      ④棄去上清,加入含有鈣、鎂離子的培養基中止消化反應,并洗滌2-3次后,加入完全培養基。

      ⑤用吸管吹打,使細胞充分散開后用紗網過濾后分瓶培養。



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